本节主要介绍仪器有关校准的基础内容，在了解校准之前，我们先回顾一下手工法测定生化项目的原理，以GLU（葡萄糖酶法测定）为例，简要介绍如下： 【原理】
葡萄糖可由葡糖氧化酶氧化成葡糖酸及过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的生成量与葡萄糖量成正比，紫外可见分光光度计505nm处读取吸光度值。反应式如下：
【操作】 取数支16mm×100mm的试管，按表1进行操作。
表1 葡萄糖氧化酶法操作步骤
（注：葡萄糖标准应用液浓度为5mmol/L）
混匀，置37℃水浴中，保温15min，分光光度计波长505nm，比色杯光径1.0cm，以空白管调零，分别读取标准管和测定管得吸光度。 【计算】 从以上手工法检测GLU的过程中，我们可以很容易理解自动生化分析仪的校准（calibration），也称定标，其作用与手工操作中的标准管相同，都是为计算测定结果时提供比对的依据。生化分析仪在每个项目开始测试时都应该进行校准，计算出校准系数储存在计算机中，那么患者在相同的条件下测定出吸光度值就可以得出相应的浓度或活性结果了。 使用校准品对临床生化自动分析仪进行校准，是为临床提供准确性和可靠性测定数据的必要条件，各项目必须使用校准物质进行校准，校准物质的定制由国际公认的一级标准物质通过逐级传递而确认。反过来，这些校准物质定制也应该能够溯源到国际一级标准物质，标准物质的定制是根据标准物质等级用相应的标准物质测量程序（方法）测量。溯源性是检验结果的属性，检验结果由检验程序获得，故检验程序的建立者负责溯源性的建立。根据ISO17511，常规检验结果的溯源性通过不间断的交替出现的测量程序和测量标准（校准物）而建立，这些程序和校准物通常具有不断降低的测量不确定度。计量学溯源链应以相反方向的降序校准等级描述，即从高计量学参考到终用户结果。涵盖各种可能情况的广泛的临床检验量值溯源链的结构如下图：
量值溯源作为提高和保证准确性的重要手段，已逐渐被广泛接受，检验结果的溯源性将成为检验试剂生产和临床实验室检验中的重要质量指标。
【校准类型（Calibration type）】校准，简单而言是通过已知浓度的校准品来建立浓度与吸光度之间的数学函数关系，那么在相同的条件下仪器读取样品反应的吸光度值，通过校准得到的数学函数（工作曲线）就可以推倒出我们需要的浓度或活性值。
以日立7180型全自动生化分析仪为例，简述校准类型如下： Linear：线性校准，分为K因素法、两点线性和多点线性。以两点线性为例，通过数学上两点确定一条直线的简单原理，用两个已知浓度的校准品测其吸光度值，得到浓度与吸光度A的关系。
2. Logit-log3p、4p、5p：对数函数，后渐进线与X轴平行，3p、4p、5p代表的是拟合曲线时参数的多少，也即在我们选择Logit-log5p对数函数时，曲线拟合复杂程度高，适用于随浓度升高而吸光度表现为收束的工作曲线。具体的计算公式，感兴趣的老师可以参考我们的仪器说明书。
3.exponential：指数函数，与Logit-log 3P、Logit-log 4P、Logit-log 5P 不同、该方法的工作曲线随浓度的增加吸光度出现离散趋势，目前使用该校准类型的试剂极少。
指数函数（exponential）
4.spline：样条函数，在此方法中将每一标准液测定值连接起来（点对点）形成一个完整曲线。校准品N与N-1点与点之间互相兼顾，去拟合校准工作曲线，例如校准品S1/S2/S3，S1与S2对应的吸光度之间曲线的拟合的弧度，取决于S3值的高低。该校准方法拟合度高，能够更好的反应真实值，所用的试剂项目也比较多。
样条函数（spline）
5.line graph：折线法，各校准品所得的吸光度值，点与点之间用直线连接，得到各浓度段不同的K值。在一些酶法测定K/NA时常使用，但是现在电解质的测定基本都被电极法取代，使用较少。
折线法（line graph）
6. IsozymeP/Q:同工酶法,目前已不使用，感兴趣的老师同样可以参考我们的仪器说明书。
生化分析仪有Blank，2piont，Full，Span四种校准方法，那他们的区别是什么，在什么情况下使用，以及我们如何判断校准数据，敬请期待我们下一期的微信内容。
参考资料：
临床检验操作规程临床化学常用项目自动分析仪（第三版）实用检验医学（下）
